M.A. Lucena Robles; C. Ramírez Tortosa; M. Gómez-Morales.
El desarrollo de una resistencia a los fármacos por parte de las células tumorales es uno de los mayores problemas encontrados en la quimioterapia del cáncer. Los mecanismos bioquímicos y celulares que han sido implicados en el desarrollo de este fenómeno son variados. Uno de los mas comúnmente empleados por las células resistentes a la quimioterapia para la detoxificación de fármacos y de sustancias extrañas a las mismas es la sobreexpresión de la glicoproteína de membrana P-170 (Gp-P), la cual está relacionada con la permeabilidad de la membrana plasmática (Juliano y Ling, 1976; Gottesman, 1993).
La utilización de líneas celulares para el estudio de la multirresistencia a fármacos es un procedimiento experimental ampliamente utilizado (Juliano y Ling, 1976; Biedler, 1994). Es un modelo biológico simple que facilita la interpretación de los resultados y mediante el cual pueden obtenerse fácilmente líneas celulares que sobreexpresan la glicoproteína Gp-P por el cultivo de las mismas con la presencia continua con fármacos que actúen como sustrato de esta glicoproteína.
Nuestro grupo de investigación tiene experiencia con líneas celulares de mamíferos que presentan un fenotipo MDR no amplificado tales como MCF-7, SK Mel-5, HeLa, B16 y L1210-S (Wu y cols., 1992; Tóth y cols., 1992; O'Valle y cols, 1995); otras que presentan una expresión constitutiva tales como MDCK y LLC-PK1 (Pastan y cols., 1988; García del Moral y cols., 1995); y un tercer grupo de células, obtenidas en nuestro laboratorio, en las que ha sido inducido un fenotipo MDR amplificado por la exposición continua a agentes citotóxicos tal como la sublínea MCF-7/ADR (Lucena y cols., 1993), o bien han sido cedidas a nuestro laboratorio, tal como L1210-R.
Los trabajos relacionados con la detección de la glicoproteína Gp-P mediante citometría de flujo y sobre la modulación de su expresión por agentes farmacológicos empleando líneas celulares como modelo experimental, recogen los siguientes aspectos principales:
1. Aspectos metodológicos relacionados con la detección de la glicoproteína Gp-P mediante citometría de flujo.
2. Ensayos funcionales de la capacidad de transporte de la glicoproteína Gp-P a través de la membrana citoplasmática.
3. Marcaje simultáneo de la glicoproteína Gp-P y del contenido en ADN.
4. Actividad de distintos agentes químicos y farmacológicos sobre la expresión de la glicoproteína Gp-P.
Los resultados preliminares más importantes y, sobre los que podría girar la discusión dentro del "workshop" del grupo de trabajo de "Multirresistencia a fármacos", son los siguientes.
1. En base a los resultados obtenidos por nuestro grupo (García del Moral y cols., 1995; O'Valle y cols., 1995) y a los de otros autores (Krishan y cols., 1991; Herzog y cols., 1992), pueden ser empleados diferentes métodos de fijación y permeabilización para detectar la glicoproteína Gp- P mediante citometría de flujo.
2. El empleo de controles isotipo y el cálculo de la intensidad de expresión mediante la incorporación media de fluorescencia específica permite obtener una estimación objetiva de la expresión de glicoproteína Gp-P en una población celular (Lucena y cols., 1993; O'Valle y cols., 1995).
3. Mediante la citometría de flujo es posible demostrar la presencia de clones celulares que expresan la glicoproteína Gp-P dentro de una población mayoritaria que no la presenta (Epstein y cols., 1989; Krishan y cols., 1991; Aguilar y cols., 1992; O'Valle y cols., 1995).
4. El marcaje simultáneo de la glicoproteína Gp-P y del contenido en ADN de una población celular demuestra que, aquélla es expresada con mayor intensidad por las células que se encuentran en las fases de síntesis de ADN y de G2-mitosis respecto a las células localizadas en fase GoG1 (Ramachandran y cols., 1993; Lucena y cols., 1993; O'Valle y cols., 1995).
5. La expresión de glicoproteína Gp-P puede ser inducida en distintas líneas celulares normales y transformadas por la incubación continua con diversos agentes farmacológicos que actúan como sustratos de la glicoproteína Gp- P, tales como la ciclosporina A (Herzog y cols., 1993; Aguilar y cols., 1992; García del Moral y cols., 1995) o distintas antraciclinas (Cowan y cols., 1986; Lucena y cols., 1993). Esta inducción puede ser comprobada mediante una inmunofluorescencia indirecta o por la realización de ensayos funcionales.
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