Pétriz J., y García López, J.

Dept. de Criobiología i Teràpia Celúlular. Centre de Referencia de Citometría Izasa-Coulter. Institut de Recerca Oncológica. Hospital Duran i Reynals. Barcelona.

La línea celular CHO-K1 deriva de un subclón de la línea celular parental CHO, y fue iniciada de una biopsia de ovario de un hámster chino adulto. Estas células tienen requerimiento para la prolina y un número modal de cromosomas de n=20, además de presentar niveles indetectables de proteína p53.

Mediante selección celular gradual en presencia de vinblastina (VB), hemos obtenido una línea celular resistente a dicho fármaco, caracterizando cada uno de los niveles de resistencia (10, 20, 40, 80, 160, 320, 640, y 1280 ng/mL) respecto a parámetros de tamaño (FS) y granulosidad (SS), contenido en ADN y ciclo celular, expresión de Glucoproteína-P (Gp-P), extrusión de rodamina 123 (R123) y el efecto de sus moduladores, y la expresión de la proteína p53 en forma mutada, mediante citometría de flujo.

El proceso de selección estudiado respecto al nivel de resistencia adquirido, y tiempo en días necesario para alcanzarlo, sigue un modelo de curva exponencial (R2=0.97, b=2.57, a=0.001, n=8). Unicamente tuvieron capacidad clonogénica el 2x10-4% de las células parentales, y estas presentan fenotipo p53 mutante. Los cambios en los par metros morfológicos están relacionados con las concentraciones crecientes del fármaco, invirtiéndose la relación FS/SS por encima de 160 ng VB/mL. Además, el estudio del ciclo celular ha revelado tres diferentes compartimentos de proliferación respecto a la concentración de VB: r1=1.86, r2=1.13, r3=2.06, siendo r=(GO/G1)/(S+G2M), mientras que la concentración de 1280 ng VB/mL selecciona una población secundaria tetraploide, aparentemente dependiente de la primaria.

Estos resultados sugieren que p53 mutante no sólo se asocie con una progresiva "malignización" de las células durante el proceso de selección, sino que además favorezca la sobreexpresión de Gp-P u otros mecanismos relacionados con la resistencia a múltiples drogas.