La anormalidad en el contenido de ADN es un parámetro utilizado en patología en el diagnóstico, determinación de pronóstico y tratamiento de tumores sólidos. La citometría, tanto de flujo como de imagen, permite la cuantificación de la desviación del contenido normal de ADN. Sin embargo, la diversidad de la metodología utilizada en los diferentes laboratorios es patente y puede ser una de las causas determinantes de los resultados variables que se obtienen en cuanto a la utilidad clínica de la cuantificación de ADN, en diversos tumores sólidos Es, por tanto, imprescindible intentar conseguir una estandarización del método a seguir, al objeto de que dichos resultados puedan ser comparables entre sí y dotar a estas determinaciones de una base sólida para su utilidad en tumores sólidos. De esta forma nos uniremos al proceso seguido en este campo por grupos de trabajo en otros países de nuestro entorno.

Los principales factores que influyen en el análisis cuantitativo de ADN son los siguientes:

- Tipo de aparato utilizado: la experiencia establece que los resultados obtenidos mediante citometría de flujo y de imagen son comparables. No obstante, existen divergencias reales en algunos casos cuyas causas deben ser objeto de estudio. Por otro lado, es lógico, dada la diferencia entre ambas metodologías, que el protocolo de estandarización se estudie por separado, aunque, básicamente, los puntos claves del proceso presentan problemas similares.

- Tipo de muestra utilizada: es necesario analizar las ventajas y desventajas de los diferentes tipos de muestra a utilizar. Aunque es preferible el uso de muestras en fresco, ello no siempre es posible y presenta algunas desventajas, principalmente en citometría de flujo en la que se pierde la evidencia tumoral de la muestra analizada. - Preparación de la muestra: existen problemas en cuanto a la representatividad de la muestra debido a la heterogeneidad tumoral, a la suficiencia del material, mantenimiento de su vitalidad y forma de conservación.

En cuanto al procedimiento de dispersión de la muestra es preciso verificar la influencia de los agentes utilizados (enzimáticos, químicos, mecánicos).

- Marcaje de la muestra: a tener en cuenta son las características físico-químicas del colorante, su estequiometría, especificidad y estabilidad, así como la concentración celular y del fluorocromo en citometría de flujo.

- Control de calidad de la preparación y coloración de la muestra: es preciso establecer el tipo y la validez del control interno y externo, ya que constituyen la referencia de nuestra medición. - Calibración del aparato: la fiabilidad de las mediciones dependen del control periódico de la linearidad del aparato. Para ello también hay que establecer cuál es la muestra de referencia más adecuada.

- Análisis de los datos obtenidos/Interpretación del histograma de ADN: este es uno de los temas más controvertidos.