Los resultados de la técnica de marcaje in vitro con bromodesoxiuridina (BrdU) pueden verse seriamente comprometidos por la manipulación de la muestra antes de que ésta llegue al laboratorio de patología o citometría. Se han estudiado los efectos del tiempo y la temperatura de almacenaje de las muestras sobre el marcaje in vitro con BrdU,al objeto de acotar las condiciones en las que una muestra debe ser mantenida desde su obtención hasta el momento de su procesado en el laboratorio. Se utiliz¢ un grupo de animales controles (ratas de 30 d¡as, n=5) que recibieron una inyecci¢n intraperitoneal de BrdU (100 mg/kg) y fueron sacrificados a los 60 minutos. Tras disecar el timo se obtuvieron dispersados celulares por maceración. Las suspensiones celulares fueron fijadas en etanol al 70% y congeladas a -70ºC hasta el momento del análisis. Para el marcaje in vitro con BrdU se utilizaron cinco animales de los que, tras el sacrificio, se obtuvieron fragmentos tímicos. Un fragmento de cada animal fue inmediatamente dispersado, y el pool celular obtenido incubado (60 minutos, 37ºC, atmósfera humidificada del 5% de CO2 en aire) en presencia de BrdU 20 ug/ml BrdU en RPMI con 10% suero bovino fetal). Otros fragmentos t¡micos fueron almacenados durante distintos intervalos de tiempo (15, 30 y 60 minutos) bien a temperatura ambiente o a 4§C, y a continuaci¢n fueron incubados con BrdU en las condiciones anteriormente expuestas. Tras la incubación las muestras fueron lavadas por centrifugación, fijadas en etanol 70% y almacenadas a - 70ºC hasta el momento del análisis. La fracción de fase S fue calculada por métodos de citometría de flujo en función del contenido en ADN y del marcaje con BrdU. La fracci¢n de fase S fue similar tras el marcaje in vivo y en el grupo sometido al marcaje in vitro inmediatamente tras el sacrificio. La proporción de fase S fue menor en cualquiera de los otros grupos, disminuyendo a medida que la incubaci¢n con la BrdU se aleja del momento del sacrificio. La separaci¢n de los picos de células marcadas y no marcadas se atenúa a medida que aumenta el tiempo. De forma general no se observaron diferencias en cuanto a la temperatura de almacenamiento. En el grupo mantenido a temperatura ambiente durante 60 minutos la incorporación de BrdU fue mínima. Se concluye que el tiempo transcurrido entre la obtención de la muestra y el inicio del procesado de la misma es de capital importancia, siendo de dudosa utilidad aquellas muestras recibidas tras un lapso mayor de 15 minutos.