E. Carbajo-Pérez, S. Carbajo, J.M. López, A. Fenández, F. Gárate.

Dpto. de Morfología y Biología Celular. Universidad de Oviedo. Dpto. de Anatomía e Histología Humanas. Universidad de Salamanca.

Aún cuando el marcaje in vivo con bromodesoxiuridina es de indiscutible utilidad en estudios experimentales, su utilización en la investigación clínica está muy restringida. Como alternativa al marcaje in vivo se puede proceder al marcaje in vitro. El marcaje in vitro de suspensiones celulares no presenta problemas metodológicos particulares, no así el marcaje in vitro de secciones de tejido. Existen datos contradictorios en lo que a la viabilidad del marcaje in vitro de secciones de tejido se refiere, de forma particular en relación con las condiciones de presión en las que se desarrolla la incubación y la dosis de marcaje de BrdU. En el presente trabajo se ha estudiado la viabilidad del marcaje con BrdU in vitro en condiciones atmosféricas. Para el estudio se utilizaron seis ratas blancas de 30 días. Tras sacrificar tres animales por dislocación cervical se obtuvieron pequeños dados de tejido tímico (2 mm de lado) y finas lonchas de tejido hep tico (1 mm aprox.). Tras lavar las muestras de tejido en solución de Hank fueron incubadas (60 minutos, 37ºC, atmósfera humidificada del 5% de CO2 en aire) con dos diferentes concentraciones de BrdU (20 ug/ml y 4 mg/ml en RPMI con un 10% de suero bovino fetal). Tras dos lavados en solución de Hank fueron fijadas en solución de carnoy e incluidas en parafina para posteriormente obtener de los bloques secciones de 4 um de grosor. Como control se utilizaron suspensiones de células tímicas obtenidas de los mismos animales y sometidas al mismo proceso, y secciones de hígado y timo obtenidas de tres animales a los que sesenta minutos antes del sacrificio se les administró una dosis de 100 mg/kg de BrdU. La BrdU incorporada fue identificada sobre las secciones de tejido mediante técnica inmunocitoquímica y por citometría de flujo en las suspensiones celulares. El marcaje in vitro de muestras tisulares, independientemente de la concentración de BrdU presente en el medio, no produjo en ningŁn caso las características observadas en las secciones de los animales control. Estas diferencias son imputables al difícil acceso de la BrdU hacia el interior de la muestra de tejido, dado que el índice de marcaje obtenido de las suspensiones tímicas fue similar al de las secciones de los animales que recibieron una inyección de BrdU antes del sacrificio.

Financiado por el proyecto DF 93-218-58.