ANALISIS DEL CICLO CELULAR EN UNA SERIE DE GLIOMAS HUMANOS

K. Alkiza*, B.Adán*, A.Alvarez**, J.M. Garibi*** y J.V. Lafuente*.

* Dpto. Neurociencias. Univ. País Vasco.

** Dpto. Biología Celular y C. Morfológicas. Univ. País Vasco.
*** Serv. Neurocirugía. Hospital de Cruces.

La citometría de flujo permite la cuantificación del ADN nuclear en una población celular, diferenciando así los grupos de células que se encuentran en cada una de las fases del ciclo GO-G1, S y G2M. Por ello es una técnica útil en el estudio de la biología tumoral, ya que nos permite establecer el porcentaje de células en fase de proliferación así como la detección de aneuploidias.

Para el estudio se ha utilizado material parafinado de 30 gliomas de diferente grado histológico procedentes del Hospital de Cruces. La preparación de las muestras se realizó siguiendo la metodología propuesta por Headley y Vindelov sobre 3 cortes de 50 um, desparafinización en xilol y rehidratación en cadena de alcoholes decrecientes. Seguidamente se realizó una digestión mecánica y enzimática del tejido utilizando pepsina (0,1%) y filtrado a través de una malla de 50 um de di metro de poro. Finalmente se procedió a la tinción de la suspensión nuclear con yoduro de propidio (50ugr/ml), añadiendo RNAsa (50ugr/ml) al medio.

Las muestras fueron analizadas en un Epics 752 mediante el Software Para-1 de Coulter.

Observamos que existe una relación directa entre el índice de proliferación (% de células en fase S+% de c‚lulas en fase G2+M) y el grado de malignidad histológica. La presencia de poblaciones aneuploides es más frecuente en glioblastomas y astrocitomas de alto grado siendo esto menos usual en astrocitomas de bajo grado. Entre los tumores analizados encontramos una serie de casos con dos poblaciones dominantes. En este caso hay que diferenciar entre la población normal y la patológica. Una posibilidad podría ser considerar como normal aquella en que la moda del pico GO+G1 se encuentre más cercana a la población tomada como control. Este tipo de tumores nos crean la necesidad de establecer nuevas pautas a la hora de analizar los histogramas.