La sangre de cordón umbilical (CU) es una nueva fuente de progenitores hemopoyéticos (PH) de alto poder proliferante. Para analizar el efecto de la expansión sobre los PH en u cultivo de expansión, hemos monitorizado durante 15 días el comportamiento de 9 muestras de CU, a las que se ha sometido a selección positiva mediante un método inmunomagnético indirecto, utilizando el AcMo My10, SAM-Dynabeads (Dynal) y el separador magnético Isolex-50 (Baxter). La mediana de pureza de estas muestras ha sido de 78% (44-86). Las células seleccionadas se han cultivado en medio suplementado con STF y citoquinas (SCF, IL3, IL6, GM- CSF y G-CSF a 50 ng/ml) en diferentes combinaciones. En los días +5, +10 y +15 se realizó demipoblación y suplementación con medio y citoquinas frescas. Los controles evolutivos han consistido en contaje de c‚lulas nucleadas totales (CN), cultivos clonogénicos y citometría de flujo. Se utilizaron los AcMo 8G12-PE (CD34), HLA-DR-PE-Cy5, CD38-FITC, CD11b-PE, CD15-FITC y CD13-PE-Cy5 y se realizaron estudios en doble y triple color.

Con el fin de analizar a la población de progenitores más inmadura hemos definido 3 regiones, de acuerdo con el nivel de fluorescencia expresado al inicio: CD34 totales (por encima del nivel marcado por el control negativo isotípico), CD34+ (de acuerdo con la región positiva a día 0) y CD34++ (considerando como nivel la media de fluorescencia a día 0 + 1 desviación standard). Asimismo se ha analizado la población CD34+, HLA-DR. Los resultados globales de la expansión, en veces de incremento, se expresan en la tabla siguiente:

     controles           día +5                 día +10                   día +15

   CN                  22.9 (+/- 12)          242.7 (+/- 73)           2483 (+/- 455)
   CFU-GM              37.6 (+/- 22)           79.0 (+/- 45)            126.7 (+/- 43)
   CD34 TOT             7.6 (+/- 4)            31.5 (+/- 18)             30.1 (+/- 11)
   CD34+                4.2 (+/- 0.8)           6.1 (+/- 0.3)             7.3 (+/- 2.2)
   CD34++               1.5 (+/- 0.1)           0.32 (+/- 0.1)            0.96 (+/- 0.2)
   CD34+/DR             4.4 (+/- 0.5)           2.3 (+/- 1.3)             2.95 (+/- 2.0)

El estudio de la población madura generada mostró la presencia mayoritaria de c‚lulas CD11b-/CD15+ en los cultivos que combinaban SCF, IL-3 e IL-6 y de células CD11b+/CD15+ en los que además se adicionaba G-CSF y GM-CSF.

A la vista de estos resultados se puede concluir que los PH de CU pueden amplificarse ex vivo a lo largo de los 15 días de cultivo. El análisis de los progenitores más inmaduros muestra una expansión durante los primeros 5 días de cultivo, durante los cuales un incremento neto de PH es posible, y abre la puerta a una posible aplicación del CU en protocolos de trasplante de adultos.