INTRODUCCION: La citometría de flujo permite analizar diversos aspectos de la actividad funcional de las células fagocíticas, obviando la necesidad de proceder a técnicas de separación celular. Los trastornos más importantes de las células fagocíticas se deben a defectos del metabolismo oxidativo y de las glioproteínas de membrana CD11/CD18. El factor estimulador de colonias GM-CSF estimula la capacidad funcional de estas células, estando disponible para su uso en clínica.

OBJETIVO: Medir el metabolismo oxidativo y la expresión de moléculas de adhesión en condiciones normales y tras exposición a GM-CSF para disponer de unos parámetros de respuesta a esta citoquina. MATERIAL Y METODOS: Se obtuvieron muestras de sangre en heparina libre de aditivos de donantes voluntarios sanos. Se estudió el metabolismo oxidativo en muestras de sangre total incubadas con E. Coli y con FMLP (m‚todo de Orpegen) a los 2, 5 y 10 min. La incubación se realizó sin agitación y se paró introduciendo las muestras en hielo, procediendo inmediatamente al análisis. Paralelamente se analizó la expresión de CD11a,b,c y CD18 mediante incubación con anticuerpos marcados con FITC o PE. Todos los estudios se llevaron a cabo en condiciones basales y tras incubación con GM-CSF recombinante (3ng/1x10 6) células. El análisis se realizó en un citómetro FACSscan.

RESULTADOS: Cuando las células se incubaron con E. Coli se activó el metabolismo oxidativo en el 70, 87 y 90% de ellas a los 2, 5 y 10 min, respectivamente. La exposición a GM-CSF aumentó la respuesta en los primeros 2m un 13%, en los siguientes intervalos, con prácticamente todas las células oxidadas, el incremento fue del 3%. El efecto de FMLP sobre el metabolismo se observó a partir de 10 minutos en el 5- 20% de las células (Media 9+5%), en condiciones basales y en el 11 a 50% (Media 25+14%) tras incubación con GM-CSF. El número de c‚lulas activadas era más del doble en todos los casos y no se observan cambios en su intensidad de fluorecencia. La expresión antigénica normal de los PMN frente a CD11a, CD11b, CD11c y CD18 fue del 96 a 99% en todos los casos en condiciones basales. La intensidad media de fluorescencia aumenta 5-10% en las CD11a, 18- 40% CD11b, 11-40% en CD11c y 30-37% en CD18, tras incubar las c‚lulas con GM-CSF.

CONCLUSIONES: Los siguientes resultados nos presentan paralelamente el efecto del GM-CSF sobre las glicoproteínas de membrana responsables de la adhesión y la activación del metabolismo con el peptido de membrana FMLP y nos indican las condiciones optimas para analizar por citometr¡a el efecto de esta citoquina sobre polimorfonucleares.