ESTUDIO POR CITOMETRIA DE FLUJO DE LA RESPUESTA FUNCIONAL DE LOS GRANULOCITOS EN LA DIABETES: CORRELACION CON EL ESTADO METABOLICO Y CLINICO.

E. Mascarell, B. Blasco, G. Juan, E. Alonso, J.E. O'Connor.

Dpto. de Bioquímica y Biología Molecular. Universidad de Valencia.

Los granulocitos de sangre periférica desempeñan un papel esencial en la inmunidad inespecífica con funciones que implican a la membrana plasmática, las mitocondrias y los lisosomas. La Diabetes Mellitus es la enfermedad metabólica grave y de mayor prevalencia. En su evolución destaca la aparición de infecciones graves que son la primera causa de muerte en situaciones de descompensación metabólica. Esta mayor susceptibilidad se relaciona con una alteración de la fagocitosis, la quimiotasis y la capacidad bactericida de los granulocitos (PMN). Sin embargo, los datos disponibles son dispersos y no se han correlacionado con el grado de control metabólico de la enfermedad y el estado clínico de los pacientes.

Hemos aplicado la citometría de flujo (EPICS Elite) para el estudio funcional de suspensiones de leucocitos de individuos sanos y diab‚ticos, obtenidas de sangre periférica liberada de hematíes por agregación sobre Ficoll-Hypaque. Se han analizado, en condiciones basales, en experimentos in vitro de incubación con glucosa y tras mantenimiento prolongado de la sangre, el potencial de membrana mitocondrial, la producción espontánea de radicales libres y la respuesta oxidativa tras estimulación quimiotáctica. Por otra parte, se ha determinado la cinética de la muerte celular en estas condiciones.

Nuestros resultados indican que, comparados con los controles, los PMNs de diabéticos utilizan menos la glucosa exógena como sustrato respiratorio y generan ligeramente más peróxido de hidrógeno en respuesta al PMA. En experimentos de envejecimiento in vitro, la respuesta oxidativa de los PMNs sanos es máxima a las 48 horas, mientras que la respuesta de las células de diabéticos es mucho menor. En estas condiciones, la apoptosis de los granulocitos de diabéticos es marcadamente superior. Estos datos confirman la menor capacidad de respuesta funcional de los granulocitos en la diabetes y sugieren una mayor labilidad de estas c‚lulas en tales condiciones metabólicas.

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