ANALISIS DE RETINAS "IN VITRO" CON FLUO-3 MEDIANTE MICROSCOPIO LASER CONFOCAL.

B. González; J.M.García Fernández.

Dpto. de Morfología y Biología Celular de la Universidad de Oviedo. 33072 Oviedo.

En el campo de las neurociencias, el microscopio láser confocal ha resultado un espectacular avance porque constituye una importante herramienta para el estudio de células vivas, ya que trazadores fluorescentes pueden ser incorporados en las células para medir cambios fisiológicos en el citosol (pH, Ca++), metabolismo celular, potencial de membrana... de neuronas.

Nuestro estudio trata de establecer la funcionalidad de los fotorreceptores que son resistentes a la degeneración retiniana que afecta a los ratones que poseen la mutación rd. Para ello, utilizamos el fluorocromo Fluo-3 que responde a cambios en la concentración de Ca++ intracelular. En la célula in vivo, la luz provoca una disminución en la concentración del Ca++ intracelular por tanto, si sometemos la retina a pulsos de luz deberíamos observar una disminución en la fluorescencia emitida por el fluo-3.

Los resultados obtenidos hasta ahora no nos ha permitido obtener una diferencia clara en la emisión de fluorescencia durante los pulsos de luz pero sí observamos que existe mayor cantidad de fluorescencia en los fotorreceptores, por lo tanto mayor concentración del Ca++, que en el resto de células de la retina. El número de fotorreceptores marcados "in vitro" en los ratones rd, disminuye dr sticamente a medida que avanza el proceso degenerativo. Esto ha sido comprobado previamente utilizando la t‚cnica de inmunocitoquímica. En el presente estudio mostramos que el Fluo-3 es un marcador adecuado para el estudio "in vitro" de fotorreceptores.