El inmunofenotipo de las subpoblaciones linfocitarias de sangre períferica usando la citometría de flujo puede proporcionar medidas precisas, tanto de la distribución de las subpoblaciones linfocitarias de S.P. como de su intensidad de fluorescencia para cierto antigeno. Estas posibilidades han atraído rápidamente la atención de inmunólogos y hematólogos entre otros, al demostrarse su utilidad clínica por su contribución al diagnóstico y/o a la valoración pronostica y terapéutica de diferentes situaciones, de las que merece destacar, por su importancia, el recuento de células T CD4 en individuos VIH+, la evolución del pronóstico en el mieloma múltiple y la monitorización post-trasplante de médula ósea. De acuerdo con esto, ha aumentado la necesidad de establecer apropiados controles de calidad y obtenci¢n de medidas precisas, con el fin de evitar artefactos técnicos que podrían ocasionar resultados erróneos.

Como consecuencia, diferentes grupos, asociaciones científicas y otras instituciones han propuesto recientemente una serie de recomendaciones con el fin de obtener resultados exactos, fiables y reproducibles de unos laboratorios a otros. En la mayoría de estas pautas se recomienda un panel mínimo de anticuerpos monoclonales, para identificar la pureza de linfocitos en la ventana de análisis, así como poner el cursor de positividad y calcular para cada especie todos los linfocitos T, B, NK y las principales subpoblaciones T CD4 y T CD8, lo cual eleva el número de tubos por muestra con el consiguiente aumento del costo. En el presente estudio se describe un nuevo método que permite analizar de forma simultanea y en una sola medición las principales subpoblaciones linfocitarias de sangre periférica, incluyendo el recuento de las células T, B y NK totales y de las subpoblaciones de células T CD4+ y T CD8+. Para ello se emplea la técnica de inmunofluorescencia directa en tres colores realizando la lectura en un cit¢metro de flujo. El análisis de los resultados en 60 muestras de SP de individuos sanos (n=23) y linfopénicos (n=37) muestra un elevado procedimiento cl sico, utilizando los dobles marcajes CD45/CD14, CD3/CD19, CD3/CD56, CD3/CD4 y CD3/CD8 para las poblaciones linfocitarias mayoritarias, r=0.99 para el total de CD3+, r=0.98 para el total de CD19+, r=0.97 para el total de CD56+/CD3-, r=0.99 para el CD3+/CD4+ y r=0.97 para el CD3+/CD8+ linfocitos, la pendiente de la mejor recta es igual a 1.00 +- 0.07 (1.01 para el total de CD3, 0.99 para el total de CD19+, 0.99 para el total de CD56+/CD3-, 1.05 para las CD33+/CD4+ y CD3+/CD8+ células).

Además, mediante este nuevo método, se obtiene información adicional, tanto sobre la pureza de la ventana de análisis en linfocitos como sobre la distribución de otras subpoblaciones minoritarias T (CD3+/CD4-/CD8-, CD3+/CD4+/CD8+, CD3+/CD8+ Y CD3/CD8+++) y NK (CD3-/CD56+/CD8+ y CD3-/CD56+/CD8- ).

El empleo de este procedimiento cumple además todas las recomendaciones del CDC (Center for Disease Control) y de otras instituciones para el inmunofenotipaje de las subpoblaciones linfocitarias.