A. Lima, H. Trindade, A. Macedo, H. Carvallo, A.G. Palma Carlos

Centro de Histocompatibilidade do Sul, Campo Santana 130, 1100 Lisboa

INTRODUÇÂO: Tendo em considerçâo que as diferentes populaçôes e subpopulaçôes linfocitárias estäo desigualmente distribuídas nos diferentes orgâos linfóides, os autores, tendo tido acesso a gânglio e baço de cadáveres dadores de orgâo (CDO) estudaram o fenotipo das células mononucleares obtidas a partir destes tecidos, bem como do as populaçôes linfocitárias do sangue periférico, comparando neste último caso os resultados com um grupo testemunho normal (GTN).

MATERIAL E METODOS: Foram estudados 25 dadores cadáveres, média de idade 36.1+/-14.6. As células de baço foram obtidas a partir de um fragmento triangular de pelo menos 4 cent¡mentros de profundidade, por um processo de maceraçâo mecânica. No gânglio a separaçâo foi feita por infiltraçâo de soluçâo salina e ulterior maceraçâo, a suspensâo celular obtida foi depois separada por centrifugaçâo em gradiente de densidade. Das células mononucleares obtidas, foram dispensadas 2,5x10 5 por poço de microplaca para marcaçâo directa com os respectivos monoclonais (CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD19, CD16, CD34, CD45RO, CD56, CD57, HLA/DR), conjugados em tripla marcaçâo a fim de definirmos diferentes subpopulaçôes linfocitárias. Os linfócitos do sangue periférico foram analisados nos CDO e numa populaçâo de testemunhos normais (n=14 de idade média 25,4+/7,8) com os mesmos anticorpos, por uma técnica de imunofluorescência direct em sangue total. As análisis de citometria foram feitas num citómetro de fluxo FACScanTM (Becton Dickinson).

RESULTADOS:

                           GANGLIO             BACO          SANG.PERIF.CDO         SANG.PERIF.GTN

CD3+                     65,1+/- 11,4      31,3 +/- 12,5      67,3 +/-11,1          65,4 +/- 5,7

CD3+CD4+                 55,3+/- 10,6      18,9 +/-  9,9      45,9 +/- 12,2         65,4 +/- 5,7

CD3+CD8+                  8,2 +/- 6,0       9,3 +/-  4,5      20,2 +/-  7,2         65,4 +/- 5,7

CD8+HLADR+                1,0 +/- 0,9       2,2 +/-  1,4       1,3 +/-  1,2          2,4 +/- 1,3

CD8+CD45RO+               1,6 +/- 1,2       3,8 +/-  2,4       8,8 +/-  5,2         10,7 +/- 5,8

CD4+CD45RO+              26,4 +/- 3,2      11,8 +/-  6,5      29,6 +/-  9,9         21,0 +/- 5,3

CD19+                    22,8 +/-11,1      55,5 +/- 12,5      22,8 +/- 11,0         11,2 +/- 3,7

CD19+CD5+                 4,3 +/- 3,6       6,1 +/-  4,9       7,7 +/-  8,3          4,0 +/- 1,7

CD16+                     0,9 +/- 0,6       8,5 +/-  9,3       5,3 +/-  4,7         17,3 +/- 6,4

CD56+                     2,2 +/- 1,1       9,4 +/-  3,9       8,7 +/-  6,3         22,2 +/- 7,1

CD3+CD56+                 1,0 +/- 0,8       2,7 +/-  2,6       3,0 +/-  2,4          4,7 +/- 2,5

DISCUSSÂO CONCLUSÔES: A comparaçâo de resultados entre o CDO e o GTN mostrou que nos primeiros houve uma maior percentagem de linfócitos B(p<0.001) sendo a percentagem de células T semelhante, com maior percentagem de NK no GTN (p<0.001), alteraçôes estas atribuídas ao stress traumático e ás medidas de suporte pré colheita. No tecido linfóide verifica-se ser o gânglio aquele em que há uma maior razâo CD4/CD8. A expressâo de CD5 nas células CD19 analisada em relaçâo à expressâo total deste marcador, aparece proporcionalmente mais representada no sangue periférico (7 em 22%) do que no gânglio ou baço (4 em 22 e 6 em 55%, respectivamente). No baço encontramos maior predomínio de células citotóxicas T (CD3+CD56+) e NK CD16+ o que nos permíte especular sobre a importância deste orgâo como local de recirculaçâo destas células e consequente defesas anti tumoral. O facto de ser o orgao linfoide com menos celulas CD3, torna mais relevante a percentagem de linfocitos CD3+CD56+. No que respeita a expressao de marcadores de activaçao nas células CD8, estes nossos resultados nâo mostraram alteraçôes significativas entre os vários tecidos analisados, o mesmo se passando em relaçao as células memoria CD4 CD45RO, à excepçâo do baço, onde esta subpopulaçâo se encontra relativamente mais elevada, se considerarmos a representaçâo desta populaçâo em relaçâo ao CD4 total.