Ricardo Teixeira e Graca Lourenço

Lab. Hematología, H. Santa María, Lisboa, Portugal.

Introduçâo: A avaliaçâo de um "gate" eletrónico de FS/SS é habitualmente feita por determinaçâo da sua pureza e recuperaçâo em linfocitos. O estudo da recuperaçâo das diversas sub-populaçôes e a sua quantificaçâp parece-nos de interesse clinico.

Objectivos: 1) Avaliar o "gate" eletrónico de FS/SS. 2) Avaliar a importância de um segundo "gate" eletrónico (SS/CD3 fl) como parte de um sistema de controle de qualidade (recuperçâo de Cd3 por backgating). 3) Estudar a recuperçâo dos diversos "subsets". 4) Estudar a relaçâo dos linfocitos T CD4+ e CD8+ nâo recuperados no "gate".

Material e métodos: Foram estudados 12 individuos adultos sem doença aparente (preparaçâo da amostra em Multi-Q-Prep). Todos os estudos incluiram controles isotipicos, CD45/CD14 ("Coulter"), CD56 ("Coulter"), CD3/CD4/CD8 ("Ortho") e CD3/CD19/CD16 ("Ortho"). A an lise citométrica foi feita num XL-Profile ("Coulter") e a populaçâo linfocitária foi definida por um "gate" eletrónico (FS/SS). Incluimos no protocolo de aquisiçâo das an lisis com tripla flurescˆncia um segundo "gate" eletrónico (SS/CD3 fl). Para o estudo da pureza e recuperaçâo no "autogate" FS/SS us mos o CD45/CD14. A imunosoma foi calculada com CD3/CD19/CD16. A recuperçâo dos CD3 foi determinada por "backgating" SS/CD3 fl em "gate" eletr¢nico e comparada com a obtida em "gate" manual (SS/CD3 fl) incluindo a totalidade dos CD3+. Em 7 individuos estudamos, com protocolos desenvolvidos em "listmode", a recuperçâo dos diferentes subsets dos linfocitos T, dos CD19 e dos CD56. Nâo conseguimos estudar a recuperaçâo de CD16. Tamb‚m em "listmode", desenvolvemos protocolos que nos permitiram a quantificaçâo dos linfocitos T CD4+ e T CD8+ nâo recuperados no "autogate" de FS/SS.

Resultados (Média, Valores extremos): * Pureza: 98% (95-99.7); * Recuperaçâo: 91% (88-95); * Imunosoma: 98% (95-99).

* Recuperaçâo dos linfocitos CD3 em "gate" eletrónico: 1) com CD3/CD4/CD8: 95.7% (93.5-98.3); 2) com CD3/CD19/CD16: 96% (92.7- 98.2).

* Recuperçâo dos linfocitos CD3 em "gate" manual: 1) 94.1% (91.6- 96.8); 2) 94& (90.9-96.4). * Recuperaçâo de CD3 num "gate" eletrónico SS/CD3 FL: 1) 96.6% (94.5-98); 2) 96.2& (94.1-96.9). * Recuperaçâo dos subsets linfocitários no "auto gate" FS/SS: CD4 T= 94.3% (92.2-97.2); CD8 T= 94.3% (87.6-97.5); CD4-8-T: 96.2% (87.5-100); CD19= 95.1% (92.4-98.1); CD56=94.7% (87.5-98.2) A relaçâo CD4 T/CD8 na regiâo nâo recuperada no "gate" eletrónico FS/SS aumentou ligeiramente em relaçâo à determinada nesse "gate", sendo sempre< que 1.7 (m‚dias: 2.3 e2.2).

Conclusôes: A qualidade do "gate eletrónico FS/SSA é boa, tanto em pureza como em recuperçâo de linfocitos totais e dos diferentes "subsets". A inclusâo em protocolos de aquisiçâo de um segundo "gate" eletrónico (SS/CD3 fl) proporciona uma forma rápida e objectiva de estudar a recuperçâo dos linfocitos CD3+. Ao contr rio do que tem sido citado na literatura, nâo constatámos, em sete individuos, qualquer alteraçâo significativa da relaçâo CD4 T/CD8 T ao analisar a regiâo dos linfocitos T nâo recuperados no "auto gate" FS/SS.