H. Carvalho, H. Trindade, A. Lima, A. Macedo, M. Correia, J.A. Machado Caetano.
Introduçâo e Objectivos: O antigénio HLA-B27 é um marcador celular com interesse clínico devido á sua associaçâo com certas patologias do foro autoimunitário. A sua pesquisa pelo método clássico envolve manipulaçâo demorada e necessita de volumes de amostra superiores aos que sâo exigidos por citometría de fluxo (CF). Neste nosso trabalho procuramos comparar os resultados das duas técnicas, bem como avaliar se a incubaçâo previa com anti HLA B7 e B22 podia aumentar a especif¡cidade do teste.
Material e métodos. Foram estudadas 189 amostras, das quais 69 directamente e 120 após incubaçâo prévia das células com antisoro policlonal anti HLA B7 e B22. Resumidamente a técnica consiste em adicionar a 100 ul de sangue anticoagulado com heparina, 20 ul de Acm anti HLA B27 conjugado com FITC e 10 ul de Acm anti CD2 conjugado com PE. Após a incubaçâo procedeu-se á lise dos eritrócitos, ressuspendedo-se o botâo celular em PBS paraformalde¡do a 1%. Na técnica de incubaçâo prévia justou-se 20 ul de anti B7 e B22 aos 100 ul de sangue, seguindo-se uma incubaçâo de 30 minutos e após lavagens seguiu-se a técnica já descrita. A análise foi feita num citómetro de fluxo FACScan (BD) seleccionando-se os linfócitos num dot-plot de tamanho versus complexidade. Os resultados do teste foram avaliados pelas alteraçôes da média de canais (MC) de FL1 das células CD2+, sendo os sinais de fluorescência interpretados em histogramas de FL1xFL2 em escala de 4 décadas logarítmicas de 1024 canais. Foram considerados como positivos os resultados que apresentaram uma média superior a 10.
Resultados: Os nossos resultados mostraram a existência de 3 padrôes distintos baseados na MC, podendo relacionar-se o padrâo de maior MC com as amostras
B27 positivas e o duvidoso com as amostras que foram confirmadas como sendo B27 negativas e B7 ou B22 positivas. A incubaçâo prévia negativou 5 das 16 amostras duvidosas. Acomparçâo das amostras duvidosas com as positivas, mostraram desvios significativos (p<0.001). A incubaçâo com os anticorpos anti B7 e B22 mostrou uma diminuiçâo das MC de 26.4 para 16.1 (p<0.068) nos soros duvidosos e de 80.7 para 48.9 (p=0.001) nos soros positivos.
Grupo A - B27 positivo MC = 80,7 +/- 27,0 (N=13)
Conclusâo: A incubaçâo com anti B7 e B22 apesar de ter negativado apenas 5 das amostras duvidosas, levou a uma diminuiçâo da média de canais, pelo que se poderá considerar ser um método capaz de aumentar especificidade. Os autores discutem a possivel influˆncia do t¡tulo do anticorpo nesta resposta. O método rápido e económico do que o clássico, permitiendo responder sempre que o resultado for negativo pelo que apenas será necessário confirmar os resultados positivos. A execuçâo técnica é simples nâo sendo necessario software especial para a sua realizaçâo.