F. Medina, C. Segundo, C. Rodriguez, J.A. Brieva.

Servicio de Inmunología. Hospital Universitario Puerta del Mar. Cádiz.

Introducción y Objetivos

CD95 (FAS, APO-1) es una molécula de membrana que ha sido claramente implicada en procesos de apoptosis. Su entrecruzamiento mediante anticuerpos monoclonales (AcMo) induce el desarrollo de apoptosis en diversos sistemas celulares. Las células B del centro germinal (CG) son un claro ejemplo de fase celular sujeta a procesos selectivos mediados por apoptosis.

En este trabajo se analiza la posible implicación de CD95 en la apoptosis de células B humanas de CG altamente purificadas.

Metodología

La purificación de linfocitos B de Cg se realizó combinando técnicas de formación de rosetas con hematíes de carnero, técnicas basadas en expresión diferencial de antígenos (Ag) de superficie utilizando anticuerpos nonoclonales (AcMo) específicos e inmunoselección magnética. El análisis de Ag de superficie se realizó utilizando AcMo específicos mediante técnicas de inmunofluorescencia directa e indirecta y se valoró mediante citometría de flujo. La apoptosis de la población de CG se estimó mediante citometría de flujo y tinción con ioduro de propidio.

Resultados

Mediante AcMo y citometría de flujo se demostró que las células CG expresaban CD95+bajo, mientras que las células B del manto folicular aisladas no lo hacían. La expresión de CD95 en células CG permanecía inalterada durante las primeras 18 horas de cultivo, para aumentar discretamente su expresión entre 24-30 horas, momento en el que la mayoría de las células han desarrollado apoptosis. La adición de AcMo de clase IgM (pero no de clase IgG) anti-CD95 adelantaba en aproximadamente 6 horas la entrada en apoptosis de las células B de CG (determinada como células en fase sub-G0). La utilización de AcMo anti-CD95 también adelantaba la aparición de alteraciones fenotípicas descritas en el desarrollo de apoptosis de las células B de CG, tales como el descenso de CD21, CD22, CD11a, CD54, CD40 y CD45.

Todos estos datos sugieren que CD95 pudiera vehiculizar importantes señales de apoptosis en las células B de CG humanas.