ESTUDIO CINETICO DE LOS CAMBIOS ASOCIADOS A LA APOPTOSIS DE
TIMOCITOS Y CELULAS DE BAZO DE RATON
Pilar Echaniz, Jesús Barado, M. Dolores de Juan y Emilio
Cuadrado.
Servicio de Inmunología. Hospital de Aránzazu. 20080 San
Sebastián
El proceso de muerte celular por apoptosis se acompaña de una serie de
cambios que aparecen secuencialmente y que pueden ser analizados por
citometría de flujo.
OBJETIVOS:
Analizar la aparición de estos cambios en suspensiones de
timocitos y linfocitos maduros a lo largo de 24h de incubación, y en
presencia de diversos inductores de apoptosis.
METODOS:
Cambios en las propiedades de tamaño y forma detectables en
FCS/SS; perturbación de los fosfolípidos de membrana detectada
por captación de merocianina (MC504); fragmentación
internucleosomal del DNA analizada con la técnica de difenilamina, y alteraciones
de permeabilidad con incorporación de ioduro de propidio (IP) al DNA
celular.
RESULTADOS:
Tanto en timocitos como en linfocitos maduros observamos
cinéticas diferentes para los cambios citados: Inicialmente se aprecian
alteraciones en FCS/SS y captación de MC504, ya evidentes entre las 2 y 4 horas
de incubación; la proporción de células con estos cambios aumenta de forma casi
lineal a lo largo de las 24 h de estudio, hasta un máximo que varia
según cual sea el estímulo inductor. Estos cambios precoces
podrían considerarse indicadores de preapoptosis. Posteriormente, a partir
de las 12 horas la aparición de células con membrana permeable al IP.
La proporción de células que muestran estas alteraciones
varía notablemente según cual sea el tipo celular y las condiciones
usadas para inducir apoptosis.