J. Rojano, P. Castañeda, A. Pérez.

Servicio de Inmunología. H. Puerta del Mar, Cádiz.

La tipificación HLA-B27 es sin duda la más frecuente de cuantas se realizan rutinariamente en el contexto HLA-enfermedad. Sin embargo, la técnica de citotoxicidad dependiente de complemento en placas Terasaki conlleva una serie de inconvenientes que podrían ser resueltos mediante técnicas de Citometría de Flujo (CF). Para testar esta posibilidad hemos estudiado dos AcMo antiB27 y su posible aplicabilidad en la determinación rutinaria de este alelo HLA.

Metodología: Mediante una técnica convencional de CF (100 ul de sangre total, 15' de incubación de Ac. a temperatura ambiente, solución lisante, configuración habitual de un citómetro FASCAN, etc.) se estudiaron dos AcMo anti B27 fluoresceinados, enfrentándolos a diferentes muestras de tipaje conocido, en las que estaban representados todos los Ag HLA con conocida reactividad cruzada (XR) hacia B27 (excepto B47): El ABC-m3 (Inmunotech) fue enfrentado con 32 muestras (7 de ellas B27+), mientras el Ac. FD705 (One Lambda) se testó contra 81 muestras (13 de ellas B27+). Las reactividades se calcularon en forma de diferencia de canales con el control (-) (DC +- desviación standard), tanto en leucocitos totales como en gate linfoide, y las fincas crosreacciones fueron analizadas con el programa de análisis serológico "Serolo" (gentil cesión de M. Kreisler, H. Puerta de Hierro). El Ac. FD705 fue además estudiado en sensibilidad, especificidad, reproductibilidad y reactividad frente a muestras B27+ y B27- de 1, 3 y 5 días de antigedad.

Resultados (gate linfoide): Ac ABC-m3: A pesar de su mayor potencia en muestras B27+ (DC=297+-122) en comparación al FD705 (DC=151+-81), se evidenciaron fuertes XR con HLA-B7 y en casos de homocigosis para otros ag HLA crosreaccionantes con B27. El 36% de las células B27- del panel ofrecían reactividades superiores a 50 DC y el 12% superiores a 100 DC. Ac. FD705: mostró una especificidad y sensibilidad del 100% al aplicarle un cut-off de 50 DC, incluso con muestras de 5 días. Cuando, mediante el programa "Serolo", fueron analizadas débiles reacciones en muestras B-27-, se descubrieron XR no descritas en serología convencional con B38, B39 y ciertos haplotipos B44; la homocigosis para estos Ag suponía reacciones de hasta 38 DC.

Conclusiones: En nuestro estudio, el Ac. FD705 se ha mostrado altamente efectivo para su uso rutinario al aplicarle un cut-off de 50 DC; no obstante, por la existencia de débiles XR (y posibles combinaciones de subtipos crosreaccionantes HLA clase I no testados), parece prudente confirmar mediante serología convencional aquellas muestras con 40