EFECTO IN VITRO DE LA INTERLEUCINA 2 SOBRE LA MUERTE CELULAR POR
APOPTOSIS EN LA LEUCEMIA LINFATICA CRONICA B.
R. Castejón, J.A. Vargas, J.C. Gea-Banacloche, M. Briz, Y. Romero, E.
Berrocal, A. Durantez.
Servicios de Medicina Interna y Hematología. Clínica Puerta de
Hierro. Madrid.
Introducción:
La leucemia linfática crónica tipo B (LLC-B)
es una enfermedad neoplásica caracterizada por la acumulación
lenta y progresiva de linfocitos B monoclonales, CD5+ y mayoritariamente en fase
G0 del ciclo celular. En contraste con su prolongada vida in vivo, cuando se
incuban células de LLC-B se produce la muerte celular a pesar de la
presencia de suero bovino fetal en el medio. Esta muerte celular fisiológica,
en ausencia de inflamación, se consigue mediante apoptosis: una
vía de muerte celular programada, estructuralmente definida. Esto sugiere
que la supervivencia celular depende de la existencia de factores humorales
presentes in vivo. El objetivo de nuestro estudio ha consistido en el análisis
de los efectos de la interleucina 2 (IL-2) sobre la apoptosis in vitro de células B,
CD5+, de pacientes con LLC-B.
Pacientes y métodos:
Hemos estudiado 23 pacientes, 15 mujeres y 8
hombres. Se obtuvieron las células leucémicas mediante una centrifugación
diferencial y una posterior selección negativa utilizando hematies de carnero. La
purificación de las células B, CD5+, fue siempre superior al 90%.
La identificación y cuantificación de la apoptosis en la población se realizaron
valorando la distribución del contenido celular de DNA por un marcaje
standard con ioduro de propidio (técnica de Nicoletti) mediante citometr¡a de flujo,
tanto de células recién obtenidas como tras cultivo (18 horas) en
ausencia o presencia de IL-2 (1000 y/o 500 U/ml). Se utilizó un citometro
FACScan (Becton Dicknson) y los programas Paint-a-gate y CellFit para el an lisis
de los datos. Los cambios estructurales y la fragmentación del DNA se
confirmaron mediante microscopía y electroforesis en gel de agarosa
respectivamente.
Resultados:
La observación de la apoptosis en los cultivos de linfocitos B
nos confirma la muerte celular espont nea in vitro. En los linfocitos recién
obtenidos de sangre periférica la muerte celular por apoptosis es de 3.8%
con valores entre 0.0 y 15.0%. Después de 18 horas de cultivo, la incidencia de
muerte celular es de 20.5% con un rango de 3.5 a 32.0%. En contraste con estos
resultados, la respuesta a IL-2 tras 18 horas, mostró una clara inhibición de la
apoptosis: en 16 de los 23 pacientes, el porcentaje de células apoptóticas es
similar a los valores ex vivo. En los 7 pacientes restantes descartamos
una acción
propia de la IL-2, por ser los niveles de apoptosis comparables a los producidos
espontáneamente. Este efecto protector de IL-2 frente a la muerte celular
programada es dosis dependiente.
Conclusión:
Nuestros datos indican que la IL-2 inhibe la apoptosis in vitro
en un porcentaje elevado de pacientes con LLC-B, lo que permite plantear la
hipótesis de que la IL-2 sea un factor de supervivencia celular in vivo.